Joanna (Keira Knightey) en Michael (Sam Worthington) zijn gelukkig getrouwd. Hij houdt zich met commercieel vastgoed bezig, zij is schrijfster. Tijdens een feestje maakt ze kennis met Laura (Eva Mendes), de aantrekkelijke collega van haar man. Ze ziet die avond de wederzijdse aantrekkingskracht en als ze thuis zijn, onderwerpt ze hem aan een waar kruisverhoor. Als Michael voor zaken naar Philadelphia afreist, blijft Joanna achter in New York. Alsof de duivel er mee speelt, staat ineens haar ex, de Franse schrijver Alex met wie ze tijdens een korte break met Michael een korte romance heeft gehad, voor haar neus. Ze spreken die avond af en vanaf het eerste moment is de spanning voelbaar. Zo ook voor Michael, want Laura is ook in Philadelphia en ook zij heeft duidelijk plannen. Die avond spelen beide met vuur door zich bewust of onbewust open te stellen voor die spannende ontmoeting met die persoon waartoe ze zich aangetrokken voelen. Joanna neemt Alex mee naar het appartement van een vriend, Michael zit in de bar van het hotel en heeft ook een bed binnen handbereik. De vraag is, wie kan de druk van de situatie het beste aan en wie gaat voor de bijl...

Vertrouwen binnen een relatie, hoe ver gaat dat en wat is er voor nodig om iemand over de schreef te laten gaan? Keira Knightley laat haar man niet graag met haar rivale weggaan en is daardoor zelf ook gevoeliger voor de avances van een oude vriend bij wie ze zich heel erg op haar gemak voelt. Dit spanningsveld maakt Last Night perfect om met je partner te kijken. Het kan de nodige discussie oproepen over het moment dat de grens van het toelaatbare overschreden wordt, wiens schuld dat is en hoe je zelf in zo'n situatie zou handelen. Wat heb je liever, een partner die vreemdgaat puur om de seks, of een partner die seks afwijst, maar iedere dag hunkert naar een oude liefde? Wat is erger, lust of liefde?